南北印迹用水



超纯水用于印迹的许多步骤:样品,缓冲液,凝胶和冲洗液的制备。在进行自身印迹之前,无论是进行Southern印迹还是Northern印迹,样品制备都需要特别注意用于保护原材料(分别为DNA或RNA)的水质。

主要的样品制备步骤是通过提取,扩增和预处理使RNA变性以防止形成碱基配对的二级结构,从而进行分离。

水质参数

  • 离子
    带电分子可以通过改变溶液(缓冲液,样品等)的整体电荷,然后加速或延迟迁移来干扰迁移电泳步骤。

    在杂交步骤中离子的浓度也很重要。为了在**条件下进行杂交,应注意特定的浓度。从几乎没有离子的水开始(25°C时的电阻率18.2MΩ•cm)可确保在正确的离子强度和pH值下制备缓冲液。 
  • 有机物
    有机分子会在杂交过程中产生干扰。那些带负电荷的分子可以像DNA和RNA一样起作用,并且可以代替DNA或RNA非特异性结合。带正电的分子实际上可以与DNA或RNA和寡核苷酸结合,从而阻碍或干扰杂交过程。因此,建议使用低TOC值(<10 ppb或µg / L)以确保有机物含量方面的水质良好。 
  • 核酸
    酶核酸酶降解NA样品。使用超滤可有效去除这些酶。在将水从系统中抽出并使用之前,将超滤器安装在净化单元的出口。请参阅“ 无核酸酶水”部分。 
  • 细菌
    细菌释放可降解核酸样品的核酸酶。它们含有DNA,可能会干扰要检查的DNA。最终,它们释放出离子和有机物,这些离子和有机物可能会对印迹步骤产生负面影响。用Ultrafilter(BioPak)纯化的水细菌含量<0.1 cfu / mL。 
总而言之,考虑到与印迹步骤相关的整个过程,水应不含核酸酶和细菌,具有高电阻率和低TOC。所有这些都可以在输送高纯度水的净水设备的使用点(出口)处使用超滤设备获得。


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